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    卵巢早衰动物模型

    2017-07-31
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    临床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前减退,通常表现为女性在40岁以前出现闭经,以闭经、不育、雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征。人群发病率约为1%~3%,在继发性闭经中占2%~10%。诊断以闭经持续至少4个月(或半年以上)、排除其他原因为基础。卵巢早衰是妇科内分泌领域的常见病。

    卵巢早衰动物模型

    POF病因多种多样,具体发病机制尚不清楚。为寻找病因和有效治疗方法,必须建立与人类临床表现和发病机制相似的动物模型。国内外专家学者鉴于POF病因的多样性,建立了不同的动物模型。

    1、材料与方法

    1.1 实验材料
    雌性Wistar大鼠。

    1.2 实验动物分组
    选用雌性Wistar大鼠40只,体重260~300 g,随机分为正常对照组和实验模型组各20只。

    1.3 实验方法
    1.3.1 POF大鼠模型制备 实验模型组雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片),0.6 mg/(100 g•d)体重,灌胃1次/d,陆续在9d,建立POF动物模型。

    1.3.2 组化标本制备
    对实验动物用1%戊巴比妥钠(40ml/kg)腹腔麻醉后开胸,经左心室70滴/min滴入1%肝素钠的生理盐水500ml,同时剪开右心耳。继用0.1m磷酸盐缓冲液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定。取出实验动物的卵巢组织,放入含4%多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2h,之后将实验动物的卵巢组织切成薄片移入含20%蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放,至组织薄片沉底,经水包埋,恒冷箱陆续在横切片,片厚20μm。经OCT包埋,恒冷箱陆续在切片,片厚16 μm,-70℃保存备用。

    1.3.3 尼氏染色
    冷冻切片吹干,经PBS漂洗(5 min×3次),将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90min,取出后用蒸馏水冲洗,PBS漂洗(5 min×3次),梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,光湿微镜下观察。

    2、结果

    尼氏染色结果:
    (1)正常对照组大鼠卵巢的尼氏染色切片上,卵泡数目正常,卵泡无闭锁,间质无明显增生。
    (2)实验模型组大鼠卵巢可见卵巢萎缩,卵泡数目减少,卵泡闭锁增多,间质增生明显。
    (3)根据尼氏染色结果证明POF动物模型制备成功。

    3、讨论

    由于POF的病因与发病机制尚不清楚,为寻找有效的治疗方法及探索其发生开展规律,建立切实可靠的POF模型显得尤为重要。从现在各种造模结果来看,药物型POF模型简单可靠、容易操作,可作为研究POF的模型;但由于方法尚不够成熟,需进一步探讨药物剂量与给药时间,以构建最理想的模型。在造模的同时,还需探讨药物对其他器官(如肝、肾、神经系统等)的影响,为临床治疗给予更全面的数据。这对阐明POF发病机制、指导临床安全用药具有更重要的意义。

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